El t\u00e9rmino diagn\u00f3stico prenatal comprende todas las modalidades de diagn\u00f3stico dirigidas a detectar durante la gestaci\u00f3n una anomal\u00eda cong\u00e9nita que incluya trastornos estructurales o funcionales.<\/p>\n
Aunque la mayor\u00eda de malformaciones (50-60%) son de causa desconocida. Se estima que un 25% puede deberse a factores gen\u00e9ticos. Las alteraciones gen\u00e9ticas que se identifican en el diagn\u00f3stico prenatal se pueden clasificar en 3 grandes grupos: cromosomopat\u00edas num\u00e9ricas o estructurales, enfermedades monog\u00e9nicas y enfermedades polig\u00e9nicas\/multifactoriales.<\/p>\n
Para el diagn\u00f3stico de estas alteraciones gen\u00e9ticas se utilizan tanto t\u00e9cnicas citogen\u00e9ticas como moleculares. Adem\u00e1s, se han desarrollado t\u00e9cnicas que no necesitan realizar cultivos celulares para el diagn\u00f3stico r\u00e1pido de las cromosomopat\u00edas m\u00e1s frecuentes. Entre ellas destaca la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa cuantitativa y fluorescente (QF-PCR) y la hibridaci\u00f3n in situ fluorescente (FISH).<\/p>\n
El Estudio de las alteraciones gen\u00e9ticas en el periodo prenatal se viene realizando con muestras obtenidas mediante una t\u00e9cnica invasiva (TI), bien biopsia corial, que se obtiene entre las semanas 11-14 de gestaci\u00f3n, amniocentesis a partir de la semana 15 y cordocentesis a partir de la semana 20. Estas pruebas conllevan un riesgo de p\u00e9rdida fetal que se estima alrededor del 0,1% en la amniocentesis, del 0,2% en la biopsia corial y del 3-5% en la cordocentesis.<\/p>\n
Adem\u00e1s de las t\u00e9cnicas invasivas mencionadas, hay que destacar aquellas no invasivas como son el cribado prenatal combinado del primer o segundo trimestre y la reciente incorporaci\u00f3n del test prenatal no invasivo (TPNI), el cual se lleva a cabo con una muestra de sangre materna, permitiendo la detecci\u00f3n del riesgo de las trisom\u00edas m\u00e1s frecuentes (21, 18 y 13) y de las cromosomopat\u00edas X e Y en el ADN fetal que circula en sangre materna.<\/p>\n
Indicaciones para la realizaci\u00f3n del test prenatal no invasivo (TPNI)<\/p>\n
El TPNI, por su mayor valor predictivo positivo respecto al cribado combinado del primer trimestre, se aplica de forma contingente como prueba de segundo nivel para los embarazos con riesgo de aneuploid\u00edas en el cribado combinado del primer o segundo trimestre o embarazos con riesgo de aneuploid\u00edas por antecedentes de nacido, aborto o interrupci\u00f3n voluntaria del embarazo con cromosomopat\u00edas.<\/p>\n
Es importante se\u00f1alar que el TPNI solo esta validado como m\u00e9todo de cribado de estas alteraciones gen\u00e9ticas, pero no para ser empleado como confirmaci\u00f3n diagn\u00f3stica, por lo que cualquier resultado positivo con TPNI debe ser confirmado mediante una prueba invasiva. En las pacientes con \u00edndices de riesgo muy elevados en el cribado combinado (superior a 1:50), se recomienda realizar directamente la prueba invasiva, ya que en esta poblaci\u00f3n de gestantes es mayor el porcentaje de alteraciones gen\u00e9ticas que no se detectan por TPNI.<\/p>\n
Indicaciones para la realizaci\u00f3n de pruebas invasivas<\/p>\n
Las t\u00e9cnicas invasivas no est\u00e1n exentas de complicaciones y conllevan cierto riesgo de interferir en la evoluci\u00f3n de la gestaci\u00f3n, por lo que es esencial seleccionar las gestaciones que pueden beneficiarse de su realizaci\u00f3n. Entre ellas encontramos: a) Progenitor(es) portador(es) o afectado(s) de enfermedades hereditarias mendelianas o monog\u00e9nicas; b) Progenitor(es) portador(es) de alteraciones cromos\u00f3micas; c) Riesgo \u2265 50 en el cribado combinado de primer o cribado bioqu\u00edmico de segundo trimestre; d) TPNI con alto riesgo para trisom\u00eda 21, 18 y 13; e) TN \u2265 P99 (o \u2265 3,5 mm) en la ecograf\u00eda del primer trimestre; f) Hidropes\u00eda no inmune (HNI); g) Presencia de malformaciones fetales; h) Restricci\u00f3n del crecimiento intrauterino precoz (< semana 24) o severo (P < 3); i) Riesgo de infecci\u00f3n fetal; j) Confirmaci\u00f3n de un diagn\u00f3stico gen\u00e9tico preimplantacional (DGP).<\/p>\n
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T\u00e9cnicas de an\u00e1lisis para la detecci\u00f3n prenatal de alteraciones gen\u00e9ticas<\/p>\n
\tCariotipo<\/p>\n
El cariotipo (estudio cromos\u00f3mico de c\u00e9lulas en metafase) fetal se lleva a cabo mediante el an\u00e1lisis de c\u00e9lulas in vitro obtenidas con una prueba invasiva, pudiendo realizarse mediante an\u00e1lisis directo o con c\u00e9lulas procedentes de cultivo. Actualmente, la biopsia corial y la amniocentesis son las TI m\u00e1s utilizadas, sin embargo, hay que tener en cuenta una posible contaminaci\u00f3n de la muestra con c\u00e9lulas de origen materno tanto por l\u00edquidos amni\u00f3ticos hem\u00e1ticos como en muestras de vellosidades coriales contaminadas con decidua materna.<\/p>\n
Las muestras de l\u00edquido amni\u00f3tico no contienen c\u00e9lulas fetales en divisi\u00f3n y tienen que cultivarse in vitro mediante un cultivo largo para poder obtenerlas en metafase, convirti\u00e9ndose, el tiempo de cultivo celular, en el factor limitante de la t\u00e9cnica. Tanto en el caso de vellosidad corial como de l\u00edquido amni\u00f3tico el cultivo implica un tiempo m\u00ednimo de 8-10 d\u00edas. Como alternativa se podr\u00eda realizar un cultivo corto, de 24-48h, sin embargo, las metafases obtenidas ser\u00e1n de baja calidad.<\/p>\n
\tQF-PCR y FISH<\/p>\n
Se trata de los dos m\u00e9todos moleculares m\u00e1s empleados en muestras invasivas para el diagn\u00f3stico prenatal r\u00e1pido de las enfermedades cromos\u00f3micas. Es importante destacar que estas t\u00e9cnicas normalmente se dise\u00f1an para detectar alteraciones gen\u00e9ticas solo en los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, que son los m\u00e1s frecuentemente implicados en las aneuploidias, y que permiten ofrecer un resultado en 24-48h. Se pueden realizar tanto en l\u00edquido amni\u00f3tico como en vellosidad corial.<\/p>\n
La QF-PCR es una t\u00e9cnica citogen\u00e9tico-molecular que analiza regiones altamente polim\u00f3rficas de los cromosomas (STR). Consiste en la realizaci\u00f3n de una PCR m\u00faltiple utilizando oligonucle\u00f3tidos marcados con fluorocromos espec\u00edficos de STR localizados en los cromosomas 21, 18, 13, X e Y.<\/p>\n
La FISH consiste en la hibridaci\u00f3n de secuencias de ADN cromos\u00f3micas espec\u00edficas marcadas con fluorocromos en una preparaci\u00f3n cromos\u00f3mica.<\/p>\n
Frente a la FISH, la QF-PCR presenta varias ventajas: a) La FISH requiere m\u00e1s volumen de muestra y mayor tiempo de an\u00e1lisis; b) La FISH no permite determinar la presencia de contaminaci\u00f3n materna mientras que la QF detecta picos extras o ratios sesgados entre alelos. Por su parte, la FISH tiene la ventaja de permitir descartar\/confirmar mosaicos analizando un elevado n\u00famero de c\u00e9lulas, mientras que la QF no detecta mosaicos por debajo del 30%.<\/p>\n
\tMicroarrays cromos\u00f3micos<\/p>\n
La tecnolog\u00eda de microarrays cromos\u00f3micos (CMA) permite detectar cambios en el n\u00famero de copias (deleciones y duplicaciones) a lo largo de todo el genoma con alta resoluci\u00f3n y rapidez.<\/p>\n
En cuanto al tipo de muestra, es posible realizar CMA tanto en biopsia de vellosidades coriales, l\u00edquido amni\u00f3tico, sangre u otro tejido fetal. La muestra m\u00e1s habitual suele ser l\u00edquido amni\u00f3tico, ya que se realiza a partir de la semana 15. En paralelo a la extracci\u00f3n de ADN se recomienda realizar un cultivo celular para realizar cariotipo u otras t\u00e9cnicas en caso necesario.<\/p>\n
La realizaci\u00f3n de CMA en diagn\u00f3stico prenatal estar\u00eda indicada en los siguientes casos:<\/p>\n
\tHallazgos ecogr\u00e1ficos. TN superior al percentil 99, hallazgo ecogr\u00e1fico asociado a un s\u00edndrome concreto o hallazgo ecogr\u00e1fico inespec\u00edfico (malformaci\u00f3n ecogr\u00e1fica o retraso de crecimiento intrauterino severo (< P3) y precoz (< 24 semanas)).
\n\tAntecedentes personales o familiares. Presencia de deleci\u00f3n o duplicaci\u00f3n familiar cr\u00edptica o antecedentes familiares de reordenamiento cromos\u00f3mico en equilibrio.
\n\tPresencia en cariotipo fetal de un reordenamiento aparentemente equilibrado de novo o un cromosoma marcador.<\/p>\n
Entre las limitaciones que presenta el CMA se encuentran: no detecta mutaciones puntuales, expansiones de tripletes, reordenamientos equilibrados ni mosaicismos de bajo grado o compensados.<\/p>\n
Algoritmo diagn\u00f3stico<\/p>\n
Figura 1. Recomendaciones cuando exista riesgo de aneuploidias en el cribado, antecedentes de aneuploidias o riesgo de infecci\u00f3n fetal, cuando haya que confirmar un DGP, o cuando alg\u00fan progenitor sea portador de una translocaci\u00f3n equilibrada entre los cromosomas 13 y 21 o portador de cualquier alteraci\u00f3n cromos\u00f3mica equilibrada mayor de 5Mb.<\/p>\n
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AUTOR \u2022 Dr. Jos\u00e9 Saura \u2022 Facultativo Especialista en Bioqu\u00edmica Cl\u00ednica en el laboratorio Analiza \u2022 Hospital Marina Salud Denia<\/p>\n
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El t\u00e9rmino diagn\u00f3stico prenatal comprende todas las modalidades de diagn\u00f3stico dirigidas a detectar durante la gestaci\u00f3n una anomal\u00eda cong\u00e9nita que incluya trastornos estructurales o funcionales. Aunque la mayor\u00eda de malformaciones (50-60%) son de causa desconocida. Se estima que un 25% puede deberse a factores gen\u00e9ticos. Las alteraciones gen\u00e9ticas que se identifican en el diagn\u00f3stico prenatal… <\/p>\n